లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ యొక్క సూత్రాలు మరియు పద్ధతులు

లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క విభజన విధానం రెండు దశలకు మిశ్రమంలోని భాగాల అనుబంధంలో వ్యత్యాసంపై ఆధారపడి ఉంటుంది.

వివిధ స్థిర దశల ప్రకారం, ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీని ద్రవ-ఘన క్రోమాటోగ్రఫీ, ద్రవ-ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బంధిత దశ క్రోమాటోగ్రఫీగా విభజించారు.సిలికా జెల్‌తో పూరకంగా ద్రవ-ఘన క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు మైక్రోసిలికాతో మాతృకగా బంధించబడిన దశ క్రోమాటోగ్రఫీ అత్యంత విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతున్నాయి.

నిశ్చల దశ రూపం ప్రకారం, లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీని కాలమ్ క్రోమాటోగ్రఫీ, పేపర్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు థిన్ లేయర్ క్రోమాటోగ్రఫీగా విభజించవచ్చు.అధిశోషణం సామర్థ్యం ప్రకారం, దీనిని అధిశోషణ క్రోమాటోగ్రఫీ, విభజన క్రోమాటోగ్రఫీ, అయాన్ ఎక్స్ఛేంజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు జెల్ పెర్మియేషన్ క్రోమాటోగ్రఫీగా విభజించవచ్చు.

ఇటీవలి సంవత్సరాలలో, విభజన ప్రభావాన్ని మెరుగుపరచడానికి మొబైల్ దశను అధిక పీడనం కింద వేగంగా ప్రవహించేలా చేయడానికి ద్రవ కాలమ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వ్యవస్థకు అధిక-పీడన ద్రవ ప్రవాహ వ్యవస్థ జోడించబడింది, కాబట్టి అధిక-సామర్థ్యం (అధిక-పీడనం అని కూడా పిలుస్తారు) లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ఉద్భవించింది.

భాగం
01 లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ సూత్రం

గుణాత్మకం ఆధారంగా లెక్కించేందుకు, స్వచ్ఛమైన పదార్థాలు ప్రమాణాలుగా అవసరం;

లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ క్వాంటిఫికేషన్ అనేది సాపేక్షంగా పరిమాణాత్మక పద్ధతి: అంటే, మిశ్రమంలోని విశ్లేషణ మొత్తం తెలిసిన మొత్తం స్వచ్ఛమైన ప్రామాణిక నమూనా నుండి అంచనా వేయబడుతుంది.

భాగం
02 లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పరిమాణీకరణకు ఆధారం

కొలిచిన భాగం (W) మొత్తం ప్రతిస్పందన విలువ (A) (పీక్ ఎత్తు లేదా పీక్ ఏరియా), W=f×Aకి అనులోమానుపాతంలో ఉంటుంది.

పరిమాణాత్మక దిద్దుబాటు కారకం (f): ఇది పరిమాణాత్మక గణన సూత్రం యొక్క అనుపాత స్థిరాంకం, మరియు దాని భౌతిక అర్థం యూనిట్ ప్రతిస్పందన విలువ (పీక్ ఏరియా) ద్వారా సూచించబడిన కొలిచిన భాగం మొత్తం.

పరిమాణాత్మక దిద్దుబాటు కారకాన్ని ప్రామాణిక నమూనా యొక్క తెలిసిన మొత్తం మరియు దాని ప్రతిస్పందన విలువ నుండి పొందవచ్చు.

తెలియని భాగం యొక్క ప్రతిస్పందన విలువను కొలవండి మరియు కాంపోనెంట్ మొత్తాన్ని పరిమాణాత్మక దిద్దుబాటు కారకం ద్వారా పొందవచ్చు.

భాగం
03 పరిమాణాత్మక విశ్లేషణలో సాధారణ నిబంధనలు

నమూనా (నమూనా): క్రోమాటోగ్రాఫిక్ విశ్లేషణ కోసం ఒక విశ్లేషణను కలిగి ఉన్న పరిష్కారం.ప్రామాణిక మరియు తెలియని నమూనాలుగా విభజించబడింది.

ప్రామాణికం: తెలిసిన ఏకాగ్రతతో కూడిన స్వచ్ఛమైన ఉత్పత్తి.తెలియని నమూనా (తెలియదు): ఏకాగ్రతను పరీక్షించాల్సిన మిశ్రమం.

నమూనా బరువు: పరీక్షించాల్సిన నమూనా యొక్క అసలు బరువు.

పలుచన: తెలియని నమూనా యొక్క పలుచన కారకం.

భాగం : పరిమాణాత్మకంగా విశ్లేషించాల్సిన క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్, అంటే, కంటెంట్ తెలియని విశ్లేషణ.

భాగం మొత్తం (మొత్తం): పరీక్షించాల్సిన పదార్థం యొక్క కంటెంట్ (లేదా ఏకాగ్రత).

సమగ్రత : కంప్యూటర్ ద్వారా క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్ యొక్క పీక్ ఏరియాను కొలిచే గణన ప్రక్రియ.

క్రమాంకనం వక్రరేఖ: కాంపోనెంట్ కంటెంట్ మరియు ప్రతిస్పందన విలువ యొక్క లీనియర్ కర్వ్, తెలిసిన మొత్తం ప్రామాణిక పదార్ధం నుండి స్థాపించబడింది, ఇది విశ్లేషణ యొక్క తెలియని కంటెంట్‌ను గుర్తించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.

భాగం
04 లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ

1. పరిమాణాత్మక విశ్లేషణకు అనువైన క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పద్ధతిని ఎంచుకోండి:

l కనుగొనబడిన భాగం యొక్క గరిష్ట స్థాయిని నిర్ధారించండి మరియు 1.5 కంటే ఎక్కువ రిజల్యూషన్ (R)ని సాధించండి

l పరీక్షించిన భాగాల క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరాల స్థిరత్వం (స్వచ్ఛత) నిర్ణయించండి

l పద్ధతి యొక్క గుర్తింపు పరిమితి మరియు పరిమాణ పరిమితిని నిర్ణయించండి;సున్నితత్వం మరియు సరళ పరిధి

2. వివిధ సాంద్రతల ప్రామాణిక నమూనాలతో అమరిక వక్రరేఖను ఏర్పాటు చేయండి

3. పరిమాణాత్మక పద్ధతుల యొక్క ఖచ్చితత్వం మరియు ఖచ్చితత్వాన్ని తనిఖీ చేయండి

4. నమూనా సేకరణ, డేటా ప్రాసెసింగ్ మరియు రిపోర్ట్ ఫలితాలను అమలు చేయడానికి సంబంధిత క్రోమాటోగ్రఫీ మేనేజ్‌మెంట్ సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించండి

భాగం
05 పరిమాణాత్మక శిఖరాల గుర్తింపు (నాణ్యత)

ప్రతి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరాన్ని గుణాత్మకంగా గుర్తించండి

ముందుగా, క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్ యొక్క నిలుపుదల సమయాన్ని (Rt) నిర్ణయించడానికి ప్రామాణిక నమూనాను ఉపయోగించండి.నిలుపుదల సమయాన్ని పోల్చడం ద్వారా, తెలియని నమూనాలో ప్రతి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరానికి సంబంధించిన భాగాన్ని కనుగొనండి.నిలుపుదల సమయాన్ని ప్రామాణిక నమూనాతో పోల్చడం క్రోమాటోగ్రాఫిక్ గుణాత్మక పద్ధతి.ప్రమాణం సరిపోదుమరింత నిర్ధారణ (నాణ్యత)

1. ప్రామాణిక జోడింపు పద్ధతి

2. అదే సమయంలో ఇతర పద్ధతులను ఉపయోగించండి: ఇతర క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పద్ధతులు (వివిధ క్రోమాటోగ్రాఫిక్ నిలువు వరుసలను ఉపయోగించడం వంటివి), ఇతర డిటెక్టర్‌లు (PDA: స్పెక్ట్రమ్ పోలిక, స్పెక్ట్రమ్ లైబ్రరీ శోధన; MS: మాస్ స్పెక్ట్రమ్ విశ్లేషణ, స్పెక్ట్రమ్ లైబ్రరీ శోధన)

3. ఇతర సాధనాలు మరియు పద్ధతులు

భాగం
06 క్వాంటిటేటివ్ పీక్ కన్సిస్టెన్సీ నిర్ధారణ

క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్ అనుగుణ్యతను నిర్ధారించండి (స్వచ్ఛత)

ప్రతి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్ క్రింద ఒక కొలిచిన భాగం మాత్రమే ఉందని నిర్ధారించుకోండి

సహ-ఎలుటింగ్ పదార్ధాల (మలినాలను) నుండి జోక్యం కోసం తనిఖీ చేయండి

క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్ కన్సిస్టెన్సీ (స్వచ్ఛత) నిర్ధారణ కోసం పద్ధతులు

ఫోటోడియోడ్ మ్యాట్రిక్స్ (PDA) డిటెక్టర్‌లతో స్పెక్ట్రోగ్రామ్‌లను పోల్చడం

పీక్ స్వచ్ఛత గుర్తింపు

2996 ప్యూరిటీ యాంగిల్ థియరీ

PART 07లో సాధారణంగా ఉపయోగించే పరిమాణాత్మక పద్ధతులు

ప్రామాణిక వక్రత పద్ధతి, బాహ్య ప్రామాణిక పద్ధతి మరియు అంతర్గత ప్రామాణిక పద్ధతిగా విభజించబడింది:

1. బాహ్య ప్రామాణిక పద్ధతి: లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో ఎక్కువగా ఉపయోగించబడుతుంది

ప్రామాణిక నమూనాలుగా పరీక్షించాల్సిన సమ్మేళనాల స్వచ్ఛమైన నమూనాలను ఉపయోగించి తెలిసిన సాంద్రతల యొక్క ప్రామాణిక నమూనాల శ్రేణిని తయారు చేశారు.దాని ప్రతిస్పందన విలువ (పీక్ ఏరియా) వరకు కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడింది.
ఒక నిర్దిష్ట పరిధిలో, ప్రామాణిక నమూనా యొక్క ఏకాగ్రత మరియు ప్రతిస్పందన విలువ, అనగా W= f×A మధ్య మంచి సరళ సంబంధం ఉంది మరియు ఒక ప్రామాణిక వక్రరేఖ తయారు చేయబడింది.

ఖచ్చితమైన ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులలో, కొలవవలసిన భాగం యొక్క ప్రతిస్పందన విలువను పొందేందుకు తెలియని నమూనాను ఇంజెక్ట్ చేయండి.తెలిసిన గుణకం f ప్రకారం, కొలవవలసిన భాగం యొక్క ఏకాగ్రతను పొందవచ్చు.

బాహ్య ప్రామాణిక పద్ధతి యొక్క ప్రయోజనాలు:సాధారణ ఆపరేషన్ మరియు గణన, ఇది సాధారణంగా ఉపయోగించే పరిమాణాత్మక పద్ధతి;ప్రతి భాగాన్ని గుర్తించడం మరియు తొలగించడం అవసరం లేదు;ప్రామాణిక నమూనా అవసరం;ప్రామాణిక నమూనా మరియు తెలియని నమూనా యొక్క కొలత పరిస్థితులు స్థిరంగా ఉండాలి;ఇంజెక్షన్ వాల్యూమ్ ఖచ్చితంగా ఉండాలి.

బాహ్య ప్రామాణిక పద్ధతి యొక్క ప్రతికూలతలు:ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులు ఎక్కువగా ఉండాలి, డిటెక్టర్ యొక్క సున్నితత్వం, ప్రవాహం రేటు మరియు మొబైల్ దశ యొక్క కూర్పు మార్చబడదు;ప్రతి ఇంజెక్షన్ యొక్క వాల్యూమ్ మంచి పునరావృతతను కలిగి ఉండాలి.

2. అంతర్గత ప్రామాణిక పద్ధతి: ఖచ్చితమైన, కానీ సమస్యాత్మకమైన, ప్రామాణిక పద్ధతుల్లో ఎక్కువగా ఉపయోగించబడుతుంది

మిశ్రమ ప్రమాణాన్ని రూపొందించడానికి అంతర్గత ప్రమాణం యొక్క తెలిసిన మొత్తం ప్రమాణానికి జోడించబడుతుంది మరియు తెలిసిన ఏకాగ్రత యొక్క పని ప్రమాణాల శ్రేణిని తయారు చేస్తారు.మిశ్రమ ప్రమాణంలో ప్రామాణిక మరియు అంతర్గత ప్రమాణం యొక్క మోలార్ నిష్పత్తి మారదు.క్రోమాటోగ్రాఫిక్ కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేసి, ప్రతిస్పందన విలువగా (ప్రామాణిక నమూనా పీక్ ప్రాంతం/అంతర్గత ప్రామాణిక నమూనా పీక్ ఏరియా) తీసుకోండి.ప్రతిస్పందన విలువ మరియు పని ప్రమాణం యొక్క ఏకాగ్రత మధ్య సరళ సంబంధం ప్రకారం, అవి W= f×A , ఒక ప్రామాణిక వక్రత తయారు చేయబడింది.

అంతర్గత ప్రమాణం యొక్క తెలిసిన మొత్తం తెలియని నమూనాకు జోడించబడుతుంది మరియు కొలవవలసిన భాగం యొక్క ప్రతిస్పందన విలువను పొందేందుకు కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడుతుంది.తెలిసిన కోఎఫీషియంట్ f ప్రకారం, కొలవవలసిన భాగం యొక్క ఏకాగ్రతను పొందవచ్చు.

అంతర్గత ప్రామాణిక పద్ధతి యొక్క లక్షణాలు:ఆపరేషన్ సమయంలో, నమూనా మరియు అంతర్గత ప్రమాణం ఒకదానికొకటి మిళితం చేయబడతాయి మరియు క్రోమాటోగ్రాఫిక్ కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడతాయి, తద్వారా మిశ్రమ ద్రావణంలోని అంతర్గత ప్రమాణానికి కొలిచిన భాగం యొక్క మొత్తం నిష్పత్తి స్థిరంగా ఉన్నంత వరకు, నమూనా వాల్యూమ్ యొక్క మార్పు పరిమాణాత్మక ఫలితాలను ప్రభావితం చేయదు..అంతర్గత ప్రామాణిక పద్ధతి నమూనా వాల్యూమ్ యొక్క ప్రభావాన్ని ఆఫ్‌సెట్ చేస్తుంది మరియు మొబైల్ దశ మరియు డిటెక్టర్ కూడా, కాబట్టి ఇది బాహ్య ప్రామాణిక పద్ధతి కంటే మరింత ఖచ్చితమైనది.

భాగం
08 పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ ఫలితాలను ప్రభావితం చేసే అంశాలు

పేలవమైన ఖచ్చితత్వం దీనివల్ల సంభవించవచ్చు:

సరికాని పీక్ ఏరియా ఏకీకరణ, నమూనా కుళ్ళిపోవడం లేదా నమూనా తయారీ సమయంలో ప్రవేశపెట్టిన మలినాలను, నమూనా సీలు మూసివేయబడలేదు, నమూనా లేదా ద్రావకం అస్థిరత, తప్పు నమూనా తయారీ, నమూనా ఇంజెక్షన్ సమస్యలు, తప్పు అంతర్గత ప్రామాణిక తయారీ

పేలవమైన ఖచ్చితత్వానికి గల కారణాలు:

సరికాని పీక్ ఇంటిగ్రేషన్, ఇంజెక్షన్ లేదా ఇంజెక్టర్ సమస్యలు, నమూనా కుళ్ళిపోవడం లేదా నమూనా తయారీ సమయంలో ప్రవేశపెట్టిన మలినాలు, క్రోమాటోగ్రాఫిక్ సమస్యలు, క్షీణించిన డిటెక్టర్ ప్రతిస్పందన